E-test

tarafından | Eyl 5, 2015 | Mikrobiyoloji

Etest (Epsilometer Testi)
Etest, mantarlara veya bakterilere karşı antimikrobiyal ajanların Minimum İnhibitör Konsantrasyonunun (MİK) belirlenmesinde kullanılan kantitatif bir yöntemdir. Katı ortamda hassas MİK tayini için hem difüzyon hem de seyreltme yöntemlerinin prensiplerini birleştirir.

Metodoloji

Bakteriyel Süspansiyonun Hazırlanması:

    • Bakteriyel numune 0,5 McFarland standardına eşdeğer bir yoğunluğa ayarlanır.

    Agar Plaka Hazırlanması:

      • Mueller-Hinton agarı (veya test edilen mikroorganizma ve antibiyotik için uygun bir ortam) büyüme ortamı olarak kullanılır.
      • Ayarlanmış bakteriyel süspansiyon, tek tip bir bakteri tarlası oluşturmak için steril bir çubuk kullanılarak agar yüzeyine eşit şekilde yayılır.

      Etest Şeritlerinin Yerleştirilmesi:

        • Önceden tanımlanmış bir antibiyotik gradyanı içeren Etest şeritleri agar yüzeyine yerleştirilir.
        • Şerit ile agar arasında uygun temasın sağlanmasına dikkat edilir.

        İnkübasyon:

          • Plakalar 35°C‘de 18–24 saat inkübe edilir.

          MİK Okuması:

            • İnkübasyondan sonra, şeridin etrafında eliptik bir inhibisyon bölgesi oluşur.
            • MİK değeri, inhibisyon elipsinin kenarının Etest şeridindeki ölçekle kesiştiği noktanın belirlenmesiyle belirlenir.

            Avantajları

            • Kesin MİK değerleri sağlar.
            • Basit ve uygulaması kolaydır.
            • Çok çeşitli mikroorganizmalar ve antibiyotikler için uygundur.

            Keşif

            1. Kavram Geliştirme ve İlk Araştırma

            • 1980’ler: Hem difüzyon hem de seyreltme yöntemlerinin avantajlarını birleştirerek niceliksel MİK değerleri sağlamak için gradyan tabanlı bir antimikrobiyal duyarlılık testi kavramının tanıtılması.

            2. Ürün Geliştirme ve İlk Doğrulama

            • 1988: İsveçli bir şirket olan AB BIODISK tarafından Etest’in piyasaya sürülmesi, ticari olarak satılan ilk MİK gradyan şerit testini işaret ediyor.
            • 1990’ların başı: Etest’i et suyu mikroseyreltme ve agar seyreltme gibi standart MİK belirleme yöntemleriyle karşılaştıran kapsamlı doğrulama çalışmaları yayınlandı.

            3. Düzenleyici Onay ve Klinik Kabul

            • 1992-1995: ABD ve Avrupa dahil olmak üzere temel pazarlarda rutin klinik kullanım için düzenleyici onay.
            • Doğrulama çalışmaları, bir dizi mikroorganizma ve antibiyotik için doğruluğunu ve tekrarlanabilirliğini doğrulamaktadır.

            4. Uygulamaların Genişletilmesi

            • 1995-2000:
            • Antifungal ajanlar için Etest şeritlerinin tanıtımı, kapsamının mantar enfeksiyonlarına genişletilmesi.
            • MRSA ​​(Metisiline Dirençli Staphylococcus aureus) ve VRE (Vankomisine Dirençli Enterokoklar) gibi klinik izolatlarda direnç modellerinin belirlenmesinde kullanımının artması.

            5. Klinik Kılavuzlara Entegrasyon

            • 2000’ler:
            • Etest’in CLSI (Klinik ve Laboratuvar Standartları Enstitüsü) ve EUCAST (Avrupa Antimikrobiyal Duyarlılık Testi Komitesi) gibi kuruluşlarınkiler de dahil olmak üzere antimikrobiyal duyarlılık testi için standart klinik kılavuzlara ve protokollere dahil edilmesi.
            • Ortaya çıkan antimikrobiyal direnci izleyen çalışmalarda kullanımı.

            6. İlerlemeler ve Teknolojik İyileştirmeler

            • 2010’lar:
            • Daha fazla hassasiyet ve kararlılık için şerit tasarımı ve üretiminde iyileştirmeler.
            • Çoklu ilaca dirençli patojenleri hedefleyen daha yeni antimikrobiyalleri kapsayacak şekilde gradyan şeritlerinin genişletilmesi.

            7. Güncel Uygulamalar ve Gelecekteki Yönler

            • Günümüz:
            • Etest, MİK değerlerini belirlemek için klinik mikrobiyoloji laboratuvarlarında yaygın olarak kullanılan bir araç olmaya devam etmektedir.
            • Devam eden gelişmeler, gelişmiş doğruluk ve verimlilik için dijital analiz ve otomasyona odaklanmaktadır.
            • Otomatik mikroskopi ve AI destekli duyarlılık testi gibi yeni nesil tanı platformlarıyla potansiyel entegrasyon.

            İleri Okuma
            1. Bolmström, A., & Karlsson, I. (1988). A new MIC test based on an antibiotic gradient in an agar medium: An evaluation of the Etest. Journal of Antimicrobial Chemotherapy, 22(5), 647–652. https://doi.org/10.1093/jac/22.5.647
            2. Kronvall, G., & Karlsson, I. (1991). Multiple-zone agar diffusion testing with a novel antimicrobial susceptibility testing device. Journal of Clinical Microbiology, 29(5), 947–950. https://doi.org/10.1128/jcm.29.5.947-950.1991
            3. Brown, D. F. J., & Brown, L. (1991). Evaluation of the Etest for susceptibility testing of clinical isolates. Journal of Antimicrobial Chemotherapy, 27(2), 185–192. https://doi.org/10.1093/jac/27.2.185
            4. Jorgensen, J. H., & Turnidge, J. D. (1995). Antimicrobial susceptibility testing: A review of general principles and contemporary practices. Clinical Infectious Diseases, 20(4), 761–770. https://doi.org/10.1093/clinids/20.4.761
            5. Espinel-Ingroff, A., Pfaller, M. A., & Messer, S. A. (1999). Comparison of Etest and reference broth microdilution methods for testing antifungal susceptibilities of filamentous fungi to voriconazole and four other antifungal agents. Journal of Clinical Microbiology, 37(12), 3946–3951. https://doi.org/10.1128/jcm.37.12.3946-3951.1999
            6. Wootton, M., Howe, R. A., & Walsh, T. R. (2001). Comparison of Etest with broth microdilution and disk diffusion methods for susceptibility testing of colistin. Journal of Antimicrobial Chemotherapy, 48(4), 569–571. https://doi.org/10.1093/jac/48.4.569
            7. Rodríguez-Tudela, J. L., Alcázar-Fuoli, L., & Mellado, E. (2007). Evaluation of Etest for determining MICs of antifungal agents against clinical isolates of Aspergillus spp. Journal of Clinical Microbiology, 45(7), 2189–2191. https://doi.org/10.1128/jcm.00490-07
            8. Humphries, R. M., Ambler, J., Mitchell, S. L., Castanheira, M., Dingle, T., Hindler, J. A., & Koeth, L. (2018). Multicenter evaluation of colistin broth disk elution and colistin agar test: New CLSI susceptibility testing methods for colistin. Journal of Clinical Microbiology, 56(2), e01962-17. https://doi.org/10.1128/jcm.01962-17