“Segmentli granülosit” terimi bu hücrelerin iki temel özelliğinden türetilmiştir:
- “Segmentli” olgun nötrofillerdeki çekirdeğin ayırt edici şeklini ifade eder. Çekirdek 2-5 lob veya segmente bölünerek polimorfonükleer bir görünüm kazanır. Bu segmentasyon nötrofil olgunlaşmasının son aşamalarında, çekirdeğin bant şeklinden tamamen segmentli bir forma geçişiyle gerçekleşir.
- “Granülosit”, hücrenin sitoplazmasında spesifik granüllerin varlığını tanımlar. Bu granüller çeşitli antimikrobiyal ajanlar, enzimler ve hücrenin bağışıklık fonksiyonu için çok önemli olan diğer maddeleri içerir.
“Nötrofil” teriminin kendisi hücrenin boyanma özelliklerinden gelmektedir. Hematoksilen ve eozin (H&E) boyalarına maruz kaldıklarında nötrofiller, bazofillerin koyu mavisi veya eozinofillerin parlak kırmızısının aksine nötr pembe bir renk alır.
Bu nedenle, “segmentli granülosit” tam terimi, hücrenin ayırt edici nükleer morfolojisini ve sitoplazmik granüllerin varlığını doğru bir şekilde tanımlar; her ikisi de olgun nötrofillerin tanımlayıcı özellikleridir.
Bölümlü Granülositler
Granülopoezde Tanım ve Rol
Bölümlü granülositler, polimorfonükleer lökositler (PMN’ler) olarak da bilinir, granülosit gelişiminin (granülopoez) son, olgun aşamasını temsil eder. İnce kromatin filamentleriyle birbirine bağlanan 2-5 ayrı loba bölünmüş bir çekirdek ile karakterize edilirler. Bu hücreler periferik kanda en bol bulunan granülositlerdir ve toplam lökositlerin %45-70’ini oluştururlar, nötrofiller baskın alt tiptir (dolaşımdaki bölümlü granülositlerin ~%95’i).
Gelişimsel Bağlam (Granülopoez)
Granülopoez kemik iliğinde meydana gelir ve şu aşamalardan geçer:
- Miyeloblast → 2. Promiyelosit → 3. Miyelosit → 4. Metamiyelosit → 5. Bant (Çubuk) hücresi → 6. Bölümlü granülosit.
- Bölümlü granülositler “bant hücresi” aşamasını (çubuk çekirdekli) takip eder ve dolaşıma salınır.
- G-CSF (Granülosit Koloni Uyarıcı Faktör) gibi sitokinler tarafından düzenlenen bu süreç ~10–14 gün sürer.
- Yaşam süresi: Dokulara göç etmeden önce 6–10 saat dolaşımda kalır ve 1–4 gün yaşar.
Morfoloji
Boyut: 9–16 μm çapında.
Çekirdek:
- 2–5 lob (ortalama: 3), nükleer filamentlerle birbirine bağlanmıştır.
- Kromatin, olgunlaşma nedeniyle yoğun bir şekilde kümelenmiştir (piknotik).
Sitoplazma:
- Nötrofiller: Enzimler (örn. alkalin fosfataz, lizozim) ve antimikrobiyal proteinler içeren ince, soluk pembe granüller (spesifik/ikincil granüller). Gelişimin erken dönemlerinde oluşan azurofilik (birincil) granüller devam eder.
- Eozinofiller: Büyük, parlak turuncu-kırmızı granüller (ana bazik protein açısından zengin).
- Bazofiller: Kaba, koyu mavi granüller (heparin, histamin içerir).
Histolojik Tanımlama
- Boyama: Periferik kan yaymalarında Wright-Giemsa boyası.
Temel Özellikler:
- Nötrofiller: Soluk sitoplazmaya sahip çok loblu çekirdek (Şekil 1A).
- Eozinofiller: Belirgin turuncu granüllere sahip iki loblu çekirdek.
- Bazofiller: Yoğun mavi granüller nedeniyle belirsiz çekirdek.
- Hipersegmentasyon: ≥5 nükleer lob, B12 vitamini/folat eksikliği veya yaşlanmayla ilişkilidir.
Klinik Önem
Enfeksiyon/İltihaplanma:
- Bakteriyel enfeksiyonlarda artan nötrofiller (nötrofili).
- “Sola kayma”: Şiddetli enfeksiyonlarda olgunlaşmamış formların (bantlar) varlığı.
- “Sağa kayma”: Megaloblastik anemide hipersegmente nötrofiller.
Otoimmün Bozukluklar ve Alerjiler:
- Paraziter enfeksiyonlarda veya astımda eozinofili.
- Kronik miyeloid lösemide (KML) veya aşırı duyarlılık reaksiyonlarında bazofili.
Nötropeni: Düşük nötrofil sayısı (<1,5 × 10⁹/L), enfeksiyon riskini artırır.
Fonksiyonel Roller
- Nötrofiller: Patojenleri fagosite eder, nötrofil ekstraselüler tuzaklarını (NET’ler) serbest bırakır ve sitokinler aracılığıyla bağışıklık hücrelerini toplar.
- Eozinofiller: Parazitlerle savaşır; alerjik tepkileri düzenler.
- Bazofiller: Anafilakside histamin salgılar; anti-helmint bağışıklığına katılır.
Laboratuvar Değerlendirmesi
- Tam Kan Sayımı (CBC): Granülosit alt kümelerini niceliksel olarak belirler.
- Ayırıcı Yayma: Nükleer segmentasyonu, granülasyon desenlerini ve anormallikleri (örneğin sepsiste toksik granüller) belirler.
Patolojik Hususlar
- Reaktif Değişiklikler: Toksik granülasyon, Döhle cisimcikleri (mavi sitoplazmik inklüzyonlar) veya şiddetli enfeksiyonlarda vakuolleşme.
- Displastik Değişiklikler: Miyelodisplastik sendromlarda hipogranülarite veya psödo-Pelger-Huët anomalisi (iki loblu çekirdekler).
Şekil Referansları
Bölümlü Granülositler için Şekil Referansları
Bölümlü granülositlerin görsel olarak tanımlanması için, şu standart histoloji/hematoloji kaynaklarına bakın:
Hematoloji Atlası (WHO Sınıflandırması)
- Şekil: Bölümlü çekirdeğe sahip nötrofil (genellikle granülosit olgunlaşması üzerine bölümlerde etiketlenmiştir).
- Kaynak: Kumar & Clark’ın Klinik Tıp veya Robbins Temel Patoloji.
Wright-Giemsa Boyalı Kan Yayması Görüntüleri
Çevrimiçi Veritabanları:
- CellWiki – “Bölümlü nötrofil” veya “polimorfonükleer lökosit” ifadesini arayın.
- Wikimedia Commons – Kan hücrelerinin yüksek çözünürlüklü görüntüleri.
- CDC’nin Halk Sağlığı Görüntü Kütüphanesi (PHIL) – “nötrofil” veya “granülosit” arayın.
Eğitim Ders Kitapları
- Metin: Barbara J. Bain (Wiley-Blackwell) tarafından yazılan Kan Hücreleri: Pratik Bir Kılavuz.
- Şekil: Bölüm 3 (Normal Kan Hücreleri) segmentli nötrofillerin, eozinofillerin ve bazofillerin etiketli görüntülerini içerir.
- Atlas: Irma Pereira ve diğerleri tarafından yazılan Periferik Kan Atlası.
Granülosit Tanımlaması için Boyama Protokolleri
1. Wright-Giemsa Boyası (Kan Yaymaları için Standart)
Amaç: Granülosit tiplerini nükleer morfoloji ve sitoplazmik granüllere göre ayırır.
Adımlar:
İnce Kan Yayması Hazırlayın:
- Yaymayı tamamen hava ile kurutun.
Sabitleme:
- Lamı 1-2 dakika boyunca mutlak metanol ile doldurun.
- Tekrar hava ile kurutun.
Boyama:
- Yaymayı 3-5 dakika boyunca Wright-Giemsa boyası (önceden karıştırılmış solüsyon) ile örtün.
- Eşit hacimde fosfat tamponu (pH 6,8) ekleyin ve nazikçe karıştırın. 10-15 dakika boyunca boyayın.
Durulama:
- Yayma pembe-mavi görünene kadar damıtılmış suyla yıkayın.
Ayrımlaştırma (gerekirse):
- Fazla boyayı çıkarmak için kısa bir süre %0,1 asetik asit içine daldırın (1-2 saniye).
Havada Kurutun ve Monte Edin:
- Yağ daldırma altında inceleyin (1000x büyütme).
Sonuçlar:
- Nötrofiller: İnce leylak granüllü soluk pembe sitoplazma; çok loblu çekirdek (3–5 segment).
- Eozinofiller: Parlak turuncu-kırmızı granüller; iki loblu çekirdek.
- Bazofiller: Koyu mavi-siyah granüller; belirsiz çekirdek.
2. May-Grünwald-Giemsa (MGG) Boyası
Amaç: Granülositlerde granül görünürlüğünü artırır.
Adımlar:
- Havada kurutulmuş yaymaları 3–5 dakika boyunca May-Grünwald boyasında (metanol bazlı) sabitleyin.
- Tamponla (pH 6.8) seyreltin ve 10-15 dakika boyayın.
- Durulayın, kurutun ve monte edin.
Avantajı: Wright-Giemsa’ya kıyasla granül yapısının daha iyi korunması.
3. Granülosit Alt Tipleri için Özel Boyalar
Eozinofiller:
- Luxol Fast Blue: Eozinofil granüllerini vurgular.
- İmmünohistokimya (CD125): Eozinofil-spesifik belirteçleri belirler.
Bazofiller:
- Toluidin Mavisi: Bazofil granüllerinin metakromatik boyanması (mor-kırmızı).
- Astral Mavi: Bazofil granüllerindeki heparini boyar.
Nötrofiller:
- Miyeloperoksidaz (MPO) Boyası: Birincil granülleri (kahverengi çökelti) doğrular.
4. Hipersegmentasyon Değerlendirmesi
Boya: Wright-Giemsa.
Kriterler:
- Hipersegmente Nötrofil: ≥5 nükleer lob (megaloblastik anemide görülür).
- Normal segmentasyonla karşılaştırın (2–5 lob).
Boyama Sorun Giderme
- Aşırı renk açma: Çekirdek soluk görünür; durulama süresini azaltın.
- Az boyama: Granüller görünmez; boyama süresini artırın.
- Çökeltiler: Kullanmadan önce boyayı filtreleyin.
Mikroskobik Değerlendirme İçin Önemli Notlar
- Bant ve Segmentli Nötrofil:
- Bant hücre: Çekirdek U şeklindedir ve daralma yoktur.
- Bant hücre: Filamentlerle birbirine bağlı loblara belirgin bir şekilde ayrılmıştır.
- Patolojik Bulgular:
- Toksik Granülasyon: Koyu renkli iri granüller (sepsis, inflamasyon).
- Döhle Cisimcikleri: Mavi sitoplazmik inklüzyonlar (enfeksiyon, yanıklar).
Keşif
Bölümlere ayrılmış granülositlerin keşfi, 19. yüzyılın sonlarında mikroskopi ve boyama tekniklerindeki ilerlemelerle başlamıştır. Alman bir doktor ve bilim insanı olan Paul Ehrlich, kömür katranı boyaları kullanarak kan hücrelerini ayırt etmek için yöntemler geliştirerek çok önemli bir rol oynamıştır. 1879-1880 yılları arasında yayınlanan çalışması, nötrofiller de dahil olmak üzere çeşitli lökositlerin tanımlanmasına olanak sağlamıştır. Ehrlich bu hücreleri “polimorf çekirdekli hücreler” olarak tanımlamış, parçalı çekirdeklerine ve nötr olarak boyanan granüllerin varlığına dikkat çekmiştir. Bu, nötrofillerin ayrı bir hücre tipi olarak ilk kez net bir şekilde tanınmasına işaret ederek hematoloji ve immünolojinin temelini attı.
Ehrlich’in teknikleri sadece nötrofilleri tanımlamak için değil, aynı zamanda lösemiler ve anemiler gibi kan hastalıklarının sınıflandırılmasını sağlamak için de önemliydi. Yaklaşımı, hücre tiplerini ayırt etmek için asidik, bazik ve nötr boyalar kullanmayı içeriyordu ki bu, doktora tezinde mast hücrelerini keşfetmesinin doğrudan bir devamıydı. Bu çalışma, Paul Ehrlich Wikipedia adresinde bulunanlar gibi tarihsel anlatımlarda ayrıntılı olarak açıklanmıştır.
İşlevsel İçgörüler: Fagositozun Rolü
Ehrlich’in morfolojik tanımlamasının ardından, nötrofillerin işlevsel rolü Élie Metchnikoff’un çalışmalarıyla ortaya çıkmaya başlamıştır. 1884 yılında Rus bir biyolog olan Metchnikoff, hücrelerin bakteri gibi yabancı partikülleri yuttuğu ve sindirdiği bir süreç olan fagositozu tanımlamıştır. Gözlemleri, o zamanlar özel olarak adlandırmamış olsa da, şu anda nötrofil olarak tanıdığımız hücreleri içeriyordu. Metchnikoff’un çalışması, fagositozu temel bir bağışıklık mekanizması olarak ortaya koyması ve nötrofillerin de bu sürece dahil olan birincil hücreler arasında yer alması nedeniyle çığır açıcı olmuştur. Bu durum, Metchnikoff’un 1880’lerde “fagosit” terimini ortaya attığını belirten Phagocytosis Britannica gibi kaynaklarda belirtilmektedir.
Metchnikoff’un keşfi, daha sonra kendisine Ehrlich ile birlikte 1908 Nobel Fizyoloji veya Tıp Ödülü’nü kazandıran doğuştan gelen bağışıklık üzerine yaptığı daha geniş araştırmanın bir parçasıydı. Frontiers Immunology] (https://www.frontiersin.org/journals/immunology/articles/10.3389/fimmu.2012.00174/full) gibi çalışmalarda belirtildiği üzere, gözlemleri nötrofillerin mikroorganizmalara karşı “başlıca savaşçılar” olduğunu vurgulamıştır.
Resmi Tanınma ve Nobel Ödülü
Nötrofillerin bağışıklık sistemindeki önemi, 1908 yılında Paul Ehrlich ve Élie Metchnikoff’un bağışıklık konusundaki çalışmaları nedeniyle Nobel Fizyoloji veya Tıp Ödülü’ne layık görülmesiyle resmen tanınmıştır. Ehrlich’in katkıları arasında beyaz kan hücrelerinin tanımlanması ve sınıflandırılması yer alırken, Metchnikoff’un fagositoz üzerine yaptığı çalışmalar nötrofillerin işlevsel rolünü anlamamızı sağlamıştır. Bu dönüm noktası, Nobel Ödülü Ehrlich ve Nobel Ödülü Metchnikoff‘da belgelendiği üzere, nötrofillerin immünolojik araştırmalardaki yerini sağlamlaştırmıştır.
Sonraki Gelişmeler ve Araştırmalar
İlk keşif ve işlevsel anlayış 19. yüzyılın sonları ve 20. yüzyılın başlarında yerleşmiş olsa da, nötrofiller üzerine yapılan araştırmalar gelişmeye devam etmiştir. 1930’larda, nötrofillerdeki solunum patlaması keşfedilmiştir; bu, mikrobisidal aktiviteleri için çok önemli olan fagositoz sırasında artan oksijen tüketimini içeren bir süreçtir. Bu durum ASH Blood Phagocytes gibi tarihsel incelemelerde belirtilmiştir.
- yüzyılın ortalarında, mikroskopi ve biyokimyadaki gelişmeler, spesifik granüllerin ve enzimler ve antimikrobiyal proteinler gibi içeriklerinin tanımlanması da dahil olmak üzere nötrofil yapısının daha derinlemesine anlaşılmasını sağlamıştır. 20. yüzyılın sonlarında, PMC Neutrophil Advances gibi modern incelemelerde tartışıldığı gibi, nötrofil aktivasyonu ve fagositozda yer alan spesifik reseptörleri ve sinyal yollarını ortaya çıkaran moleküler biyoloji tekniklerinin uygulanmasına tanık oldu.
- yüzyılda yapılan araştırmalar, nötrofil fonksiyonunun karmaşıklığını ortaya çıkarmış, enflamasyon, immün modülasyon ve kanser ve otoimmün bozukluklar gibi hastalık patogenezindeki rollerini ortaya koymuştur. Bu durum Nature Neutrophil Diversity gibi son çalışmalarda ayrıntılı olarak açıklanmaktadır.
İleri Okuma
- Ehrlich, P. (1879). Beiträge zur Kenntniss der Anilinfärbungen und ihrer Verwendung in der mikroskopischen Technik. Archiv für mikroskopische Anatomie, 16, 263–277.
- Ehrlich, P. (1880). Methodologische Beiträge zur Physiologie und Pathologie der verschiedenen Formen der Leukocyten. Zeitschrift für klinische Medizin, 1, 553–606.
- Schridde, H. (1908). Über die Entwicklung und Bedeutung der neutrophilen Leukocyten im menschlichen Organismus. Virchows Archiv für pathologische Anatomie und Physiologie und für klinische Medizin, 191, 363–408.
- Maximow, A. A. (1909). Über die Morphologische Grundlage der Blutbildenden Gewebe und ihre Bedeutung für die Frage der Blutbildung. Folia Haematologica, 8, 125–199.
- Arneth, J. (1904). Über die quantitative Untersuchung der verschiedenen kernigen Formen der neutrophilen Leukocyten im normalen Blut und bei Leukämie. Zeitschrift für klinische Medizin, 54, 511–534.
- Schilling, V. (1924). Das Verhalten der neutrophilen Kernformen bei Infektionskrankheiten. Zeitschrift für die gesamte experimentelle Medizin, 41, 436–458.
- Fliedner, T. M., & Steinbach, K. (1958). Zellkinetische Untersuchungen über die Entwicklung segmentkerniger Granulozyten. Blut, 4(4), 202–218.
